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体液钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品操作步骤
点击次数:130 发布时间:2019-09-18

HL10157.3 v.A

 

体液钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

体液钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过钙离子特异性荧光探针Fluo-4与钙离子结合后,其荧光强度显著增强,在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化来测定样品总钙离子浓度而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的适用于各种体液包括血浆、血清、细胞培养液、尿液、脑脊液、唾液、等样品中总钙离子的浓度检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感。

 

技术背景

 

钙是人体中的一种重要电介质和矿物质,占1150克。其中99%的钙以氟磷灰石钙(calcium fluorophosphate apatite)形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式:一种是非弥散型蛋白结合钙,其构成约40%至50%的血清中的总钙含量;另一种为弥散型游离钙,其进一步分成具有活性的复合钙(complexed calcium)和离子钙(ionized calcium)。钙对神经肌肉兴奋性(neuromuscular excitability)、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技术,但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰,或者受限于仪器的特殊的要求。Fluo-4,一种与钙离子结合,其荧光强度迅速增强100倍的荧光探针,可以敏感测定微量游离钙离子水平。在荧光分光光度仪下,激发波长485nm,散发波长520nm,来定量测定体液中的钙浓度。

 

产品内容

 

反应液(Reagent A       毫升

饱和液(Reagent B       毫升

阴性液(Reagent C       毫升

产品说明书     1份

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里;反应液(Reagent A)避免光照;有效保证6月

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于样品操作的容器

微型台式离心机:用于样品沉淀

黑色96孔板:用于样品荧光测定的容器

荧光酶标仪:用于样品荧光分析

 

 

 

实验步骤

 

  • 样品准备

 

选择一:血浆样品

  • 准备好肝素或ACD抗凝管(注意:避免使用EDTA抗凝管)
  • 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
  • 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分(注意:避免触碰白色液体层
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70冰箱里保存

 

选择二:血清样品

1. 准备好不含抗凝剂的储存管

  • 抽取1毫升血液,置于储存管里
  • 室温下,静置30分钟,直至血液凝结
  • 放进4微型台式离心机离心15分钟,速度为2000g(或5000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分(注意:避免触碰白色液体层
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70冰箱里保存

 

选择三:细胞培养液/尿液/脑脊液/唾液等 样品 

  • 准备好1.5毫升离心管
  • 移取1毫升液体到离心管
  • 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为700g(或3000RPM,例如eppendorf 5415)
  • 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
  • 即刻置于冰槽里备用或放进-70冰箱里保存

 

  • 测定准备

 

  • 准备好上述制备的待测样品,置于冰槽里备用
  • 设定好荧光酶标仪(22℃):激发波长485nm,散发波长520nm

 

三、荧光测定

 

  • 准备1个黑色96孔板,标记为:样品孔、空白对照孔、大对照
  • 移取100微升(20微克蛋白)上述制备的样品到样品孔里
  • 移取xx微升饱和液(Reagent B到大对照
  • 移取xx微升阴性液(Reagent C到空白对照
  • 分别加入xx微升反应液(Reagent A到所有孔里
  • 轻轻摇动黑色96孔板,混匀
  • 室温下(22℃),孵育30分钟,避免光照
  • 即刻放进荧光酶标仪测读:获得相对荧光单位(relative fluorescence unit;RFU) 
  • 计算样品钙离子浓度:纳摩尔(注意:不要遗忘乘上稀释倍数

 

【(样品RFU-空白对照孔RFU)÷(大对照RFU-样品RFU)】X 345 (纳摩尔;解离常数)

注意事项

 

  • 本产品为20次操作
  • 操作时,须戴手套
  • 避免使用EDTA等处理样品
  • 孵育反应完成后即刻进行荧光测定
  • 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
  • 检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围
  • 本公司提供系列钙生化检测试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定检测敏感

 

 

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