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特殊石蜡切片中性脂质油红O直接染色试剂盒产品使用说明
点击次数:147 发布时间:2019-09-17

HL80061.2.2 v.A

 

特殊石蜡切片中性脂质油红O直接染色试剂盒产品说明书

 

主要用途

 

特殊石蜡切片中性脂质油红O直接染色试剂是一种旨在使用特殊脱蜡处理和高度脂溶性偶氮染料油性红O染色技术,分析石蜡包埋组织切片中(大程度保留的)中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等脂质状况的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片的脂质检测。用于成脂细胞定性、细胞病理学分析(脂质细胞瘤;LIPOID)和识别(脂肪肉瘤liposarcoma等研究。产品即到即用,操作简捷,性能稳定,着色清晰。

 

技术背景

 

脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂,以及其它固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。油性红O(Oil Red O),又称为27号红色溶剂(Solvent Red 27)或苏丹红5B(Sudan Red 5B),是一种脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME AZO DYE)。其分子式为C26H24N4O,分子量为408.51。染色显示脂类物质呈红色。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中,有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的脂质成分,因此使用非二甲苯类脱蜡,以大程度保护组织中的脂质成分是油性红O染色的关键。

 

产品内容

 

脱蜡液(Reagent A)          50毫升

净化液(Reagent B)   10毫升

清理液(Reagent C)   50毫升

脱水液(Reagent D)   20毫升

染色液(Reagent E)   10毫升

澄清液(Reagent F)   10毫升

产品说明书    1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里,避免光照;有效保证6

 

用户自备

 

苏木素复染试剂盒(80067):用于常规染色后复染

经典水相封片液(12146):用于染色后封片处理

烘箱:用于石蜡切片处理

中性树脂:用于切片封片

光学显微镜:用于切片染色后观察分析

 

实验步骤

 

  • 脱蜡处理

 

  • 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
  • 放进80℃烘箱,孵育30分钟
  • 室温下静置15分钟
  • 小心加上500微升脱蜡液(Reagent A在切片上,铺满整个切片样品表面
  • 室温下孵育5分钟
  • 小心移去切片上的脱蜡液(Reagent A
  • 重复实验步骤46一次
  • 小心加上200微升净化液(Reagent B在切片上,铺满整个切片样品表面
  • 室温下孵育5分钟
  • 小心移去切片上的净化液(Reagent B
  • 小心加上200微升清理液(Reagent C在切片上,铺满整个切片样品表面
  • 室温下孵育3分钟
  • 小心移去切片上的清理液(Reagent C

 

  • 样本染色处理

 

  • 小心加上200微升脱水液(Reagent D,覆盖整个生长表面
  • 室温下静置5分钟
  • 小心抽去脱水液(Reagent D
  • 重复实验步骤13一次
  • 小心加上200微升染色液(Reagent E,覆盖整个生长表面
  • 室温下静置7分钟;或直至可见红色
  • 小心抽去染色液(Reagent E
  • 室温下,小心加200微升清理液(Reagent C
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心抽去清理液(Reagent C

 

三、样本复染处理

 

  • 小心加上200微升澄清液(Reagent F),覆盖整个生长表面
  • 室温下孵育5分钟
  • 小心抽去澄清液(Reagent F
  • 小心加入200微升清理液(Reagent C
  • 室温下孵育2分钟
  • 小心抽去清理液(Reagent C
  • 样本复染处理(苏木素)
  • 即刻在一般光学显微镜下观察:脂类物质呈现红色(如果复染则细胞核呈现蓝色)

 

 

 

注意事项

 

  • 本产品为50次操作
  • 操作时,须戴手套
  • 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片,即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
  • 染色时更换试剂溶液时,保持切片面基本晾干
  • 试剂溶液在切片表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满切片表面
  • 整个操作,在避光状态下进行
  • 样品染色避免过度,肉眼可见红色即可终止染色
  • 建议使用苏木素复染试剂盒(80067),增加染色对比度
  • 染色完成后,即刻进行光学显微镜观察 
  • 样品染色后保存,避免光照
  • 封片处理,避免使用有机溶剂类包括乙醇等,而使用水相封片液;建议使用经典水相封片液(12146)
  • 本公司提供系列脂类染色试剂产品

 

质量标准

 

  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定显色清晰

 

 

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